Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
Células madre pluripotentes inducidas como posible tratamiento para la enfermedad del
Alzheimer
Induced pluripotent stem cells as a potential treatment for Alzheimer's disease
Células-tronco pluripotentes induzidas como um potencial tratamento para a doença de
Alzheimer
Milton Temistocles Andrade Salazar1
Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE; Santo Domingo
mtandrade@espe.edu.ec
Luís Manuel Chica Moncayo2
Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE; Santo Domingo
lmchica1@espe.edu.ec
María Pía Suárez Orellana3
Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE; Santo Domingo
mpsuarez3@espe.edu.ec
Josselyn Tahis Tonato Llivisaca4
Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE; Santo Domingo
jttonato@espe.edu.ec
Como citar:
Andrade, M., Chica, L., Suarez, M. & Tonato, J. (2022). Células madre pluripotentes inducidas
como posible tratamiento para la enfermedad del Alzheimer. Código Científico Revista de
Investigación, 3(3), 148-160.
Recibido: 30/09/2022 Aceptado: 01/11/2022 Publicado: 28/12/2022
1
Ingeniero en Computación y Ciencias de la Informática, Magister en Docencia Universitaria e Investigación
Educativa, Docente del área de Ciencias Humanas de la Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE Sede Santo
Domingo de los Tsáchilas.
2
Ingeniero en Sistemas, Magister en Gestión de las Tecnologías de la Información, Docente del área de Ciencias la
Computación de la Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE Sede Santo Domingo de los Tsáchilas.
3
Estudiante del primer semestre de la carrera de Ingeniería en Biotecnología de la Universidad de las Fuerzas Armadas
ESPE Sede Santo Domingo de los Tsáchilas
4
Estudiante del primer semestre de la carrera de Ingeniería en Biotecnología de la Universidad de las Fuerzas Armadas
ESPE Sede Santo Domingo de los Tsáchilas
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
149
Resumen
La presente investigación tiene como objetivo principal dar a conocer los avances científicos
que ha tenido la utilización de las células madre pluripotentes inducidas en el tratamiento del
Alzheimer. El tipo de investigación del presente estudio es documental, por lo cual se pudo detallar
el proceso de obtención de las células madre pluripotentes mediante el método de reprogramación
celular y el aporte que estas pueden brindar a los pacientes que sufren de Alzheimer. Es por ello,
que se dará a conocer cómo estas células inducidas pueden ayudar a encontrar un tratamiento
efectivo para la presente enfermedad, además se menciona los avances obtenidos en el tratamiento
de esta dolencia. Hasta el momento, el método factores de reprogramación es el que mayor
resultado positivo ha dado; debido a que las células madre pluripotentes permiten des diferenciar
a una célula somática, y con estas células se pretende formar células neuronales que contengan la
misma afección del paciente para así poder probar con diversos tratamientos en ellas. Pese a que
aún no se han obtenido resultados cien por ciento efectivos, los investigadores buscan con el estudio
de las células madre pluripotentes inducidas en el Alzheimer, mejorar la calidad de vida del adulto
mayor.
Palabras clave: células madre, pluripotentes inducidas, reprogramación celular, Alzheimer.
Abstract
The main objective of this research is to publicize the scientific advances in the use of
induced pluripotent stem cells in the treatment of Alzheimer's. The type of research of the present
study is documentary, for which it was possible to detail the process of obtaining pluripotent stem
cells through the cell reprogramming method and the contribution that they can provide to patients
suffering from Alzheimer's. That is why, it will be announced how these induced cells can help
find an effective treatment for this disease, in addition to mentioning the advances obtained in the
treatment of this disease. To date, the reprogramming factors method is the one that has given the
greatest positive result; because pluripotent stem cells allow a somatic cell to dedifferentiate, and
with these cells it is intended to form neuronal cells that contain the same condition as the patient
in order to be able to test various treatments on them. Although one hundred percent effective
results have not yet been obtained, researchers seek to improve the quality of life of the elderly
with the study of pluripotent stem cells induced in Alzheimer's.
Key words: induced pluripotent stem cells, cell reprogramming, Alzheimer's.
Resumo
O principal objetivo desta pesquisa é divulgar os avanços científicos no uso de células-
tronco pluripotentes induzidas no tratamento da doença de Alzheimer. O tipo de pesquisa do
presente estudo é documental, para a qual foi possível detalhar o processo de obtenção de células-
tronco pluripotentes através do método de reprogramação celular e a contribuição que elas podem
proporcionar aos pacientes portadores de Alzheimer. Por isso, será anunciado como essas células
induzidas podem ajudar a encontrar um tratamento eficaz para esta doença, além de mencionar os
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
150
avanços obtidos no tratamento desta doença. Até o momento, o método dos fatores de
reprogramação é o que tem dado maior resultado positivo; porque as células-tronco pluripotentes
permitem que uma célula somática se desdiferencie, e com essas células pretende-se formar células
neuronais que contenham a mesma condição que o paciente para poder testar vários tratamentos
nelas. Embora ainda não tenham sido obtidos resultados cem por cento efetivos, pesquisadores
buscam melhorar a qualidade de vida dos idosos com o estudo de células-tronco pluripotentes
induzidas no Alzheimer.
Palavras-chave: células-tronco pluripotentes induzidas, reprogramação celular, Alzheimer.
Introducción
Durante los últimos años, el aumento de la esperanza de vida y el consecuente
envejecimiento de la población ha dado lugar a la aparición de nuevas enfermedades más complejas
y crónicas, muchas de ellas imprescindibles de un tratamiento. Debido a esto, la biomedicina
moderna está intentando desarrollar nuevas técnicas terapéuticas que puedan aplicarse en estas
enfermedades y una de las más prometedoras es con un tipo de células madre.
Yamanaka (2006), en su investigación expone que la reprogramación por genes de factores
de transcripción tales como Oct4, Sox2, c-Myc, K1f4 fueron utilizados para reprogramar
fibroblastos de ratón. Estas células fueron creadas a partir de una célula somática reprogramada
genéticamente, permitiendo así pasar a un estado similar de células madre embrionarias. Cabe
mencionar que las células madre embrionarias son un tipo de células pluripotentes lo que significa
que pueden dividirse en más células madre y convertirse en cualquier tipo de célula del cuerpo, las
cuales tienen como objetivo ser utilizadas para regenerar o reparar tejidos y órganos atrofiados
como es el cerebro. Hay que aclarar que estas células dañadas debido a los diversos padecimientos
no se renuevan, un ejemplo de esto es el Alzheimer donde se presentan placas seniles o neuríticas
las mismas se denominan como grupos de células nerviosas muertas; Por lo tanto, según
Eurostemcell (2016) el insertar nuevas células en un cerebro con Alzheimer no solucionará el
problema porque las neuronas están muriendo. El avance científico de reprogramación por
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
151
proteínas recombinantes fue el propulsor para retomar las investigaciones en todo el mundo con
diferentes métodos de reprogramación celular.
Los últimos avances científicos, en la actualidad con células pluripotentes inducidas han
ayudado a la obtención de un mayor entendimiento en el desarrollo celular normal y anormal de la
enfermedad neurodegenerativa del Alzheimer, buscando el propósito de reducción casi absoluta
del rechazo inmune de estas células, cuando sean probadas en el cuerpo del paciente afectado,
durante mucho tiempo, los únicos modelos disponibles para estas investigaciones eran los animales
de laboratorio. Sin embargo, en la actualidad, los científicos trabajan cada vez más con modelos
creados a partir de células madre pluripotentes inducidas que es lo que hizo el grupo de
investigadores para desarrollar un modelo in vitro de la enfermedad del Alzheimer hereditaria.
La presente investigación trata el cómo estas células reprogramadas han sido un gran
avance en la medicina moderna específicamente en el Alzheimer. Además, se podría revelar qué
tratamientos funcionarían mejor en cada caso en particular ayudando al desarrollo de la medicina.
Debido a que el Alzheimer varía mucho entre pacientes, estudiarlo usando células madre
pluripotentes inducidas originarias de diferentes personas podría desvelar el origen de esta
variabilidad.
Metodología
El Alzheimer es una enfermedad que daña las células nerviosas del cerebro. En los
afectados por esta enfermedad se acumulan sustancias tóxicas en el interior de las neuronas
(células nerviosas) y también en el espacio que hay entre ellas. Como resultado de esto, las
neuronas, además de no poder comunicarse entre sí, mueren.
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
152
BrightFocus Foundation (2021) expone que una de las características de la enfermedad de
Alzheimer es la acumulación de placas amiloideas entre las células nerviosas (neuronas) del
cerebro. Amiloidea es un término general para los fragmentos de proteína que el cuerpo produce
normalmente. El Beta-amiloidea es un fragmento de una proteína “arrancado” de otra proteína
llamada proteína precursora de amiloidea (APP). En un cerebro sano, estos fragmentos de proteína
se descompondrían y son eliminados. En la enfermedad de Alzheimer, los fragmentos se acumulan
para formar placas duras e insolubles.
Los Ovillos neuro fibrilares son fibras retorcidas e insolubles que se encuentran dentro de
las células nerviosas del cerebro. Ellas esencialmente son formadas de una proteína llamada tau,
que forma parte de una estructura llamada micro-túbulos. Los micro-túbulos ayudan a transportar
nutrientes y otras sustancias importantes de una parte a otra de la célula nerviosa. Los axones son
extensiones largas en forma de hilos que conducen los impulsos nerviosos fuera de la célula
nerviosa; las dendritas son extensiones cortas filiformes y ramificadas que conducen los impulsos
nerviosos hacia el cuerpo de las células nerviosas. En la enfermedad de Alzheimer la proteína tau
es anormal y las estructuras de los microtúbulos se destruyen.
En la medida que progresa la enfermedad de Alzheimer, se reduce el tejido cerebral. Sin
embargo, los ventrículos, cavidades dentro del cerebro que contienen líquido cefalorraquídeo, se
agrandan notablemente. En las primeras etapas de la enfermedad de Alzheimer, la memoria a corto
plazo comienza a disminuir cuando las células en el hipocampo se degeneran. Aquellas personas
con la enfermedad pierden la capacidad de realizar tareas rutinarias. En la medida que la
enfermedad de Alzheimer se propaga a través de la corteza cerebral (la capa exterior del cerebro),
el juicio empeora, pueden ocurrir explosiones emocionales y el lenguaje se deteriora. El avance de
la enfermedad conduce a la muerte de un mayor número de células nerviosas y más cambios
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
153
subsiguientes en el comportamiento, tales como el deseo de deambular y nerviosismo o agitación.
En las etapas finales, las personas pueden perder la capacidad para alimentarse solos, hablar,
reconocer a otras personas y pierden control de las funciones corporales. La memoria empeora y
puede desaparecer casi por completo. En la figura 1, se detalla la progresión de la enfermedad del
Alzheimer, partiendo de un cerebro saludable hasta llegar a una etapa grabe de la enfermedad.
Figura 1: Enfermedad del Alzheimer (progresión)
Nota. Por BrightFocus Foundation (Bob Morreale,2021)
Constantemente los investigadores han buscado una cura para la enfermedad del Alzheimer
sin tener un resultado óptimo, sin embargo, se ha descubierto un tipo de célula reprogramada que
puede ayudar a tratar dicha enfermedad. A estas células se las conocen como células madre
pluripotentes inducidas.
Las células madre pluripotentes inducidas (iPS) son un tipo de célula madre con
características pluripotentes, capaces de generar la mayoría de los tejidos artificialmente a partir de
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
154
una célula que originalmente no es pluripotente. Las células iPS son capaces de diferenciarse en
células de tejidos pertenecientes a las tres capas germinales de un embrión natural. Se ha
demostrado que las células iPS son idénticas en muchos aspectos, y similares en otros, a las células
madre embrionarias (ES). Por ejemplo, son iguales en morfología, expresión de ciertos genes y
proteínas, patrones de metilación del ADN, tiempo de duplicación celular y capacidad de
diferenciación a células de otros tejidos. (Liu, et al. 2011)
Existen varios métodos de reprogramación de células somáticas los cuales se detallan en la
Tabla 1 y son: la transferencia nuclear de células somáticas (SCNT), el extracto de células
pluripotenciales (ESC), la fusión celular y los factores de reprogramación o reprogramación por
proteínas recombinantes, no obstante, el método que ha dado mejores resultados o buenos
beneficios en cuanto a medicina ha sido la reprogramación por proteínas recombinantes.
Tabla 1
Métodos de reprogramación de células somáticas
Método
Descripción
Transferencia nuclear de células
somáticas (SCNT)
La transferencia nuclear de células somáticas (TNCS) es
una técnica de laboratorio para crear un embrión viable a
partir de una célula corporal y de un óvulo. La técnica
consiste en tomar un óvulo e implantarle un núcleo donante
de una célula somática. Se utiliza para fines terapéuticos y
clonación.
Extracto de células
pluripotenciales (ESC),
Extractos de células de carcinoma embrionario o de ESCs,
inducen un cambio en el programa transcripcional de las
células blanco, estimulando la expresión de genes de
pluripotencia como Oct4 y Nanog, inhibiendo la expresión
de marcadores específicos de células somáticas e
induciendo cambios epigenéticos a nivel de la estructura de
la cromatina.
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
155
Fusión celular
La fusión celular es un procedimiento que permite que dos
células se fusionen entre sí al poner en contacto sus
membranas externas citoplasmáticas. La fusión de las
membranas permite la obtención de una célula con dos
núcleos. Cuando se produce la mitosis algunas de las
células hijas van a heredar los cromosomas de ambos
padres, estos son las hibridomas
factores de reprogramación (iPSC)
iPSC son un tipo de células madre con características
pluripotenciales (capaces de generar la mayoría de los
tejidos) derivadas artificialmente de una célula que
inicialmente no era pluripotencial. Por lo general se utiliza
como una célula adulta diferenciada procedente de un
tejido, sobre la que se induce la expresión de varios genes
exógenos, tales como Oct4, Sox2, c-Myc y Klf4, capaces
de des-diferenciarla.
Elaborado por: Los autores
Factores de reprogramación (iPSC)
Chaparo O, Beltrán O. (2009). El grupo de Sheng Ding, del Scripps Research Institute en La
Jolla, California, reporta la obtención de iPS añadiendo directamente las proteínas recombinantes
Oct4, Sox2, c-Myc y Klf4, producidas en E. coli, a fibroblastos de ratón en cultivo. Usando una
variación de la técnica, el grupo de Kim, del Instituto de Células Stem de Corea y sus colaboradores
del Instituto de Células Stem de Harvard, reportan la obtención de iPS a partir de fibroblastos
humanos. Las cuatro proteínas Oct4, Sox2, c-Myc y Klf4, con una cola de nueve residuos de
arginina, para facilitar su entrada en las células blanco (técnica conocida como CPP: cell
penetrating peptide) fueron sobre expresadas en la línea celular HEK293 y obtenidas a partir de
allí, para la transformación de los fibroblastos humanos. (Zhou, et al. 2009)
El metodo que mayor aporte nos ofrece al tratar el alzheimer es el metodo factores de
reprogramacion debido a que las celulas madre pluripotentes permiten des-diferenciar a una celula
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
156
somatica, es por ello que con estas celulas se pretende formar celulas nerunoles que contengan la
mismo afeccion del paciente para asi poder probar con diversos tratamientos en ellas.
En la figura 2, se muestra gráficamente los métodos de reprogramación de células somáticas.
Figura 2
Métodos para la reprogramación de células somáticas
Nota. Por Chaparro y Beltrán (2009)
Identifican una nueva terapia contra el Alzheimer que autorregulan las células del paciente
La investigación científica realizada en el Instituto de Neurociencias de la Universidad de
Barcelona ha identificado una estrategia terapéutica contra el Alzheimer en la que las propias
reacciones de las células del paciente autorregulan las dosis del tratamiento de forma dinámica y
personalizada, dando a conocer que el uso en humanos de esta terapia aún está muy lejos, los
investigadores apuntan al empleo de astrocitos a partir de células madre pluripotentes inducidas
como una prometedora estrategia terapéutica que podría explorarse potencialmente con su estudio.
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
157
Cultivos 3d para entender el Alzheimer
Regemat (2021). Un equipo de científicos del Instituto de Investigación de la Fundación
Células Madre de Nueva York ha conseguido llevar cultivos neuronales bidimensionales poco
funcionales para estudios in vitro hacia las estructuras tridimensionales 3D y con esto se pretende
llevar la neurodegeneración a una placa de cultivo a partir de la reprogramación de células
pluripotentes inducidas hacia neuronas y otras posibles células cerebrales desde células de la piel
del paciente o muestras de sangre.
La presente investigación tiene un alcance correlacional y descriptivo; correlacional por estar
relacionada la enfermedad del Alzheimer con las células madre pluripotentes inducidas y
descriptivo por entrar en la tarea de caracterizar el objetivo de estudio de dichas células. Es por ello
por lo que se utilizó como técnica el análisis documental en donde se recopiló información
mediante la revisión sistemática de la literatura de documentos académicos y científicos, cuyos
autores son científicos de alto reconocimiento.
La investigación tiene un paradigma cualitativo ya que está centrado en detallar los avances
que se han obtenido de las células madre pluripotentes inducidas con respecto al Alzheimer. Según
Villa (2015) La investigación cualitativa es aquella que utiliza preferente y exclusivamente
información de tipo cualitativo y cuyo análisis se dirige a lograr descripciones detalladas de los
fenómenos estudiados.
Resultados
El dinamismo de las células madre con pluripotencia inducida genera el interés en el campo
investigativo para su estudio minucioso como posibles soluciones terapéuticas con diferentes
modelos de tratamientos en la enfermedad y con el mismo objetivo a llegar, producir neuronas de
igual base genética a la del paciente con alzhéimer. La presente investigación tuvo como propuesta
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
158
dar a conocer el cómo las células madre pluripotentes inducidas pueden ayudar a encontrar un
tratamiento efectivo para la enfermedad del Alzheimer.
El Alzheimer es una enfermedad neurodegenerativa irreversible cuya frecuencia aumenta
con la edad. Es una de las demencias más frecuente en mayores de 65 años que se caracteriza por
presentar como síntoma principal la pérdida de la memoria. A su vez, existen dos formas
principales de la enfermedad: la familiar, poco habitual y determinada genéticamente, y la no
familiar o esporádica, que es la que afecta a más del 95 por ciento de los pacientes. Si bien la
variante familiar o genética es menos frecuente, su estudio puede brindar claves muy importantes
para comprender la enfermedad.
Ledesma, J. S. (2021). Un grupo de investigadores del Laboratorio de Investigación
Aplicada a Neurociencias (LIAN) de Fleni logró desarrollar un modelo in vitro de la enfermedad
de Alzheimer hereditaria a partir de las células de un paciente. Se trata de un avance de gran
importancia, ya que en un futuro podría ser una herramienta muy útil para investigar y probar
tratamientos para esta demencia. Durante mucho tiempo, los únicos modelos disponibles para estas
investigaciones eran los animales de laboratorio. Sin embargo, en la actualidad, los científicos
trabajan cada vez más con modelos creados a partir de células madre pluripotentes inducidas que
es lo que hizo el grupo de investigadores del LIAN, para desarrollar un modelo in vitro de
enfermedad de Alzheimer hereditaria.
“El tema de la modelización de las enfermedades, es decir, con qué modelo cuento para
investigar y ensayar distintos recursos diagnósticos y terapéuticos sin tener que hacerlo
inicialmente en un ser humano, es un tema crítico para la medicina. Y este modelo es una
posibilidad para esto”, explicó el doctor Gustavo Sevlever, director de Docencia e Investigación
en Fleni.
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
159
El próximo paso para los investigadores de Fleni es fabricar células madre neurales y
organoides cerebrales (cultivos tridimensionales) a partir de las células madre pluripotentes
inducidas para avanzar con las investigaciones. Luego, junto con la tecnología de edición genómica
dirigida, se buscará revertir la mutación para dilucidar si esta mutación recientemente reportada
está asociada al desarrollo de la enfermedad de Alzheimer. Esto permitirá establecer de qué forma
las alteraciones genéticas impactan en el desencadenamiento de la enfermedad y en la respuesta a
un determinado tratamiento.
Conclusiones
El mejor método para reprogramación celular es el de reprogramación por proteínas recombinantes
debido a que las proteínas son capaces de atravesar la membrana celular y nuclear para obtener
células madre pluripotentes inducidas, sin ningún tipo de riesgo médico.
El impacto científico que tendría el ayudar a las personas con la enfermedad del alzheimer
aumentando así el tiempo de lucidez de estas, con las células pluripotentes inducidas es el gran
aporte teórico de nuevos conocimientos como resultado de un largo proceso investigativo.
Las células madre pluripotentes inducidas tienen beneficios a corto plazo debido que, al formar
nuevas neuronas, trasplantarlas al cerebro de un paciente con Alzheimer para crear neuronas nuevas
y sanas no es simple. Insertar nuevas células en un cerebro con Alzheimer no solucionará el
problema de las neuronas que están muriendo, sólo retrasa la enfermedad un aproximado de 5 años,
esto significaría un aumento en la calidad de vida del paciente.
Uno de los problemas de la clínica actual es la falta de fármacos para la enfermedad de Alzheimer
y el gasto que se genera en producir fármacos que fallan en los distintos estadios clínicos. Esto
imita de cierta manera lo que ocurre en el paciente. Sirve como complemento de los modelos
existentes. Esa es una de las potencialidades que tiene este proyecto más a futuro.
Código Científico Revista de Investigación Vol. 3 – Núm. 3/Julio – Diciembre – 2022
160
Pese a que no han obtenido una cura definitiva, se continua las investigaciones de avances en estas
células inducidas en el Alzheimer; asimismo, se espera que en algún momento dichas células
logren reemplazar en su totalidad las neuronas dañadas o por otro lado, que se estudie a profundidad
a las mismas para poder así descubrir la etiopatogenia de la enfermedad logrando así encontrar una
cura efectiva que ayude a mejorar la calidad de vida de los pacientes ancianos.
Referencias bibliográficas
BrightFocus Foundation. (20 de octubre del 2021). La Progresión de la Enfermedad de
Alzheimer. Recuperado de https://www.brightfocus.org/espanol/alzheimer/la-progresion-
de-la-enfermedad-de-alzheimer
Chaparo O, Beltrán O. (11 de diciembre del 2009). Reprogramación nuclear y células
pluripotentes inducidas. Revista Med. Recuperado de
http://www.scielo.org.co/pdf/med/v17n2/v17n2a09.pdf
Ledesma, J. S. (22 de septiembre del 2021). logró crear un modelo in vitro de la enfermedad de
Alzheimer hereditaria. Fleni. Recuperado de https://www.fleni.org.ar/novedades/fleni-
logro-crear-un-modelo-in-vitro-de-la-enfermedad-de-alzheimer-hereditaria/
Eurostemcell. (20 de octubre del 2016). La enfermedad de Alzheimer: ¿cómo podrían ayudar las
células madre?.Eurostemcell. Recuperado de https://www.eurostemcell.org/es/la-
enfermedad-de-alzheimer-como-podrian- ayudar-las-células-madre
Regemat.(28 de noviembre del 2021).Células madre pluripotenciales inducidas (iPSCs) usando
bioimpresión.Recuperado de https:// www.regemat3d.com/celulas-madre-pluripotentes-
inducidas
Yamanaka, S. (25 de agosto del 2006). Inducción de células madre pluripotentes a partir de
cultivos de fibroblastos adultos y embrionarios de ratón mediante factores definidos.
Science Direct. Recuperado de
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0092867406009767
Villa, A. (2015, March 3). variables de Daniel Cauas. Academia.edu.
https://www.academia.edu/11162820/variables_de_Daniel_Cauas
