Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 Caracterización genética del porcino criollo de la costa de Ecuador con microsatélites de AN D Genetic characterization of Ecuadorian coastal creole swine with DNA microsatellites. Caracterização genética de porcos crioulos da costa equatoriana com microssatélites de ADN Peláez Mendoza , Franklin Rodrigo Universidad Técnica Estatal de Quevedo fpelaez@uteq.edu.ec https://orcid.org/0000 - 0003 - 3560 - 2944 Vera Rosero , Mey Cristina Universidad Técnica Estatal de Quevedo mverar7@uteq.edu.ec https://orcid.org/0009 - 0006 - 4671 - 5628 DOI / URL: https://doi.org/10.55813/gaea/ccri/v5/n2/571 Como citar: Peláez Mendoza, F. R., & Vera Rosero, M. C. (2024). Caracterización genética del porcino criollo de la costa de Ecuador con microsatélites de AND. Código Científico Revista De Investigación , 5(2), 584 606. https://doi.org/10.55813/gaea/ccri/v5/n2/571 Recibido: 2 2 / 1 0/ 202 4 Aceptado: 13 / 11 / 202 4 Publicado: 3 1 / 12 /202 4
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 585 Resumen El estudio aborda la diversidad genética del cerdo criollo ecuatoriano, una raza de importancia económica y cultural, amenazada por su adaptación a entornos marginales y por la homogeneización genética global. Se utilizaron 50 muestras de pelo de cerdos criollos de seis provincias costeras del Ecuador, analizadas mediante 25 marcadores microsatélites recomendados por FAO/ISAG. Los resultados evidenciaron una elevada diversidad genética intra - racial, con un promedio de 9,52 alelos por locus y un número efectivo de 4,99, superiores a otras razas criollas de la región . Además, la heterocigosidad esperada y observada, junto con un valor significativo de FIS (0,116), indican posibles efectos de endogamia. En el análisis inter - racial, los cerdos criollos ecuatorianos mostraron clara diferenciación genética respecto a raza s internacionales, agrupándose con otras criollas iberoamericanas en análisis factoriales y dendrogramas de distancias genéticas. Estos hallazgos subrayan su singularidad genética y el potencial para su conservación y manejo sostenible. La implementación d e estrategias orientadas a preservar este recurso genético es esencial, considerando su importancia en sistemas de producción local y su rol en la seguridad alimentaria. El estudio refuerza la necesidad de ampliar investigaciones que integren tecnologías m oleculares emergentes y colaboraciones internacionales para la conservación de razas locales. Palabras clave: diversidad genética; cerdo criollo; microsatélites; conservación genética; Ecuador. Abstract The study addresses the genetic diversity of the Ecuadorian Criollo pig, a breed of economic and cultural importance, threatened by its adaptation to marginal environments and global genetic homogenization. Fifty hair samples from Creole pigs from six coas tal provinces of Ecuador were analyzed using 25 microsatellite markers recommended by FAO/ISAG. The results showed a high intra - racial genetic diversity, with an average of 9.52 alleles per locus and an effective number of 4.99, higher than other criollo b reeds in the region. In addition, the expected and observed heterozygosity, together with a significant FIS value (0.116), indicate possible inbreeding effects. In the inter - racial analysis, Ecuadorian criollo pigs showed clear genetic differentiation with respect to international breeds, grouping with other Ibero - American criollas in factor analyses and genetic distance dendrograms. These findings underscore their genetic uniqueness and the potential for their conservation and sustainable management. The i mplementation of strategies aimed at preserving this genetic resource is essential, considering its importance in local production systems and its role in food security. The study reinforces the need to expand research that integrates emerging molecular te chnologies and international collaborations for the conservation of local breeds. Keywords: genetic diversity; criollo pig; microsatellites; genetic conservation; Ecuador. Resumo O estudo aborda a diversidade genética do porco Criollo equatoriano, uma raça económica e culturalmente importante, ameaçada pela sua adaptação a ambientes marginais e pela homogeneização genética global. Foram analisadas 50 amostras de pelo de porcos Crio llo de seis províncias costeiras do Equador, utilizando 25 marcadores microssatélites recomendados pela FAO/ISAG. Os resultados mostraram uma elevada diversidade genética intra - racial, com uma média de 9,52 alelos por locus e um número efetivo de 4,99, sup erior ao de outras raças crioulas da região. Além disso, a heterozigosidade esperada e observada, juntamente com um
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 586 valor significativo de FIS (0,116), indicam possíveis efeitos de consanguinidade. Na análise inter - racial, os porcos crioulos equatorianos mostraram uma clara diferenciação genética em relação às raças internacionais, agrupando - se com outras raças crioulas ibero - americanas nas análises factoriais e nos dendrogramas de distância genética. Estes resultados sublinham a sua singularidade genética e o potencial para a sua conservação e gestão sustentável. A implementação de estratégias que visem a preservação de ste recurso genético é essencial, considerando a sua importância nos sistemas de produção locais e o seu papel na segurança alimentar. O estudo reforça a necessidade de novas pesquisas que integrem tecnologias moleculares emergentes e colaborações internac ionais para a conservação de raças locais. Palavras - chave: diversidade genética; porco crioulo; microssatélites; conservação genética; Equador. Introducción El cerdo denominado criollo y mestizo, lo hace ser un recurso importante desde el punto de vista genético para el desarrollo de los sistemas de producción alternativos que son menos perjudiciales ecológicamente y por otro lado fundamental para la economía de la familias o subsistencia de los pequeños y medianos productores y también aportan alimentos proteínicos de buena calidad para el consumidor (Scarpa et al , 2003). Estos cerdos criollos ha contribuido a su proceso de extinción el hecho que estos animal es estan adaptados, más que nada, a la supervivencia en un entorno de recursos nutritivos y de manejo limitados ( Linares et al., 2011). El estudio de este material genético, que por cientos de años se ha adaptado y sobrevivido a las inclemencias del medio ambiente y del manejo, ocasionadas estas últimas por la escasez de recursos, requiere de inmediato de un estudio que permita la conserv ación y el mejor uso a favor de las comunidades indígenas, manteniendo las condiciones naturales del hábitat e introduciendo normas de manejo, reproducción y alimentación, así como un estudio de las características de sus carnes de acuerdo al tipo de alime nto que reciben, que proporcione un valor agregado al producto (Fuentes, 2003). Para medir la diversidad genética entre razas se utilizarán baterías de marcadores microsatélites recomendados por expertos de la ISAG (International Society for Animal Genetics). El empleo de los microsatélites recomendada para cerdos, permite comparar lo s
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 587 resultados obtenidos con los de otros grupos nacionales o internacionales. Estos marcadores genéticos de elección para una gran cantidad de aplicaciones, como la realización de mapas genéticos, la caracterización de poblaciones y la realización de pruebas de identificación individual y control de filiación, entre otros. Como consecuencia, los microsatélites se han utilizado ampliamente en estudios demográficos ( Boitard et al. 2010; Pham et al. 2014), debido a que con ellos se puede cuantificar la variació n genética dentro y entre poblaciones o razas, permiten la identificación de introgresiones y, por último, pueden usarse para asignar individuos dentro de una población, raza o especie (Paetkau et al. 2004). En este sentido, se recomienda ampliar el conocimiento que se tiene de las características de los diferentes tipos de recursos Zoogenéticos, de los sistemas de producción en que se mantienen éstos y de los cambios que afectan a estos sistemas productivos; desarrollar marcos institucionales más fuertes para la gestión de los recursos Zoogenéticos; fomentar la concienciación, la educación, la capacitación y la investigación en todas las áreas de la gestión de los recursos Zoogenéticos; consolidar las estrateg ias y los programas de mejora y ampliar y diversificar los programas de conservación (FAO 2015). Los microsatélites de ADN son los marcadores recomendados desde hace años en los estudios de genética de poblaciones y son los marcadores de elección para conseguir, no sólo un método fiable de identificación individual y de control de las genealogías, sin o también una mejor apreciación y caracterización de la diversidad genética de las razas, así como para realizar asignaciones de individuos a razas con altos grados de fiabilidad. La aparición de otros marcadores moleculares como los SNPs está desplazando el uso de los microsatélites, aunque para estudios de diversidad genética de poblaciones locales se sigue recurriendo al uso de microsatélites fundamentalmente porque existen bases de datos de muchas razas generadas en varios proyectos de investigación nac ionales e internacionales y además porque los paneles de
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 588 SNPs se diseñan normalmente para razas comerciales internacionales que subestiman la diversidad genética de las razas locales. En el presente trabajo se pretende realizar la caracterización genética de cerdos Criollos de Ecuador, tanto la diversidad genética intrarracial de la población como la diversidad entre estos cerdos y razas porcinas Criollas, españolas e internacionales. S e estudia también la posible subestructura de la población lo que permitirá encaminar las actuaciones de gestión en años sucesivos. Metodología Muestreo Para este estudio se utilizaron 50 muestras de pelo de cerdos Criollos de Ecuador, recogidas en diferentes partes de las provincias de Los Ríos, Guayas, Esmeraldas, Manabí, Machala y Santa Elena. Figura 1: Cerdo criollo negro de la costa del ecuador 2017 Nota: Autores (2024). La procedencia detallada de las muestras se encuentra en la Tabla 1. Las muestras de pelo se han recogido en sobres de papel identificados con los datos de cada animal y se han mantenido a temperatura ambiente hasta su envío al laboratorio. Las muestras de pelo se han recibido en el Laboratorio de Genética Molecular Aplicada de la empresa Animal Breeding
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 589 Consulting S.L. (ABC) de la Universidad de Córdoba (España) y una vez allí, se les ha asignado a cada una un número de laboratorio. Tabla 1: Muestras de cerdos Criollos de Ecuador analizadas N. Lab. Provincia N. Lab. Provincia N. Lab. Provincia N. Lab. Provincia 849833 Guayas 849846 Los Ríos 849859 Santa Elena 849872 Esmeraldas 849834 Esmeraldas 849847 Manabí 849860 Santa Elena 849873 Esmeraldas 849835 Esmeraldas 849848 Los Ríos 849861 Santa Elena 849874 Esmeraldas 849836 Esmeraldas 849849 Los Ríos 849862 Santa Elena 849875 Machala 849837 Esmeraldas 849850 Manabí 849863 Santa Elena 849876 Machala 849838 Esmeraldas 849851 Manabí 849864 Santa Elena 849877 Machala 849839 Esmeraldas 849852 Manabí 849864 Santa Elena 849878 Machala 849840 Esmeraldas 849853 Los Ríos 849866 Santa Elena 849879 Machala 849841 Manabí 849854 Los Ríos 849867 Guayas 849880 Machala 849842 Manabí 849855 Los Ríos 849868 Guayas 849881 Machala 849843 Manabí 849856 Manabí 849869 Los Ríos 849882 Machala 849844 Los Ríos 849857 Manabí 849870 Los Ríos 849845 Los Ríos 849858 Manabí 849871 Esmeraldas Nota: Autores (2024). Para la diferenciación genética, estructura y distancia genética se han utilizado además otras 29 poblaciones porcinas de la base de datos del Laboratorio de Genética Molecular Aplicada de Animal Breeding Consulting S.L. y del Consorcio BioPig (http://biopig.jimdo.com). En la Tabla 2 se muestran las poblaciones utilizadas, su procedencia y el número de individuos analizado de cada población. Tabla 2: Poblaciones estudiadas, acrónimo, procedencia y número de animales analizados de cada población. RAZA/POBLACIÓN ACRÓNIMO PROCEDENCIA N 1 Criollo Ecuador EC Ecuador 50 2 Criollo Ecuador Amazonía ECAM Ecuador 15
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 590 3 Mulefoot MF USA 36 4 Red Wattle hog RWH USA 35 5 Guinea Hog GH USA 34 6 C. Baja California Sur BCS México 16 7 Criollo México MEX México 49 8 Criollo El Salvador SAL El Salvador 20 9 Criollo Cubano CUB Cuba 50 10 Criollo de Guadalupe GUA Guadalupe 31 11 Criollo de Venezuela VEN Venezuela 30 12 San Pedreño SP Colombia 14 13 Criollo del Pacífico CP Colombia 42 14 Criollo Bolivia BOL Bolivia 33 15 Pampa Rocha PR Uruguay 30 16 Caracolero Argentino (W) NEAW Argentina 44 17 Caracolero Argentino (D) NEAD Argentina 38 18 Ibérico IB España 50 19 Celta CEL España 25 20 Mangaliça MANG Hungría 25 21 Berkshire BRK Reino Unido 44 22 Tamworth TWR Reino Unido 37 23 Large Black LBL Reino Unido 45 24 Duroc DUR Internacional 50 25 Pietrain PIE Internacional 46 26 Large White LWH Internacional 29 27 Landrace LDR Internacional 26 28 Landracex Large White LXLW Internacional 19 29 Meshian MSH China 45 30 Jabalí WB España 74 Nota: Autores (2024).
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 591 Extracción de ADN. El ADN se ha extraído de las muestras de pelo con raíz de los animales referidos en la Tabla 1 mediante el siguiente protocolo. El ADN se ha extraído de muestras de sangre mediante el siguiente protocolo: 1. - Material Empleado: - TE: Tris - HCl 10 mM, EDTA 1 mM pH=8. - Tampón K: 0,372 g de KCl, 0,051g de MgCl2, 1 ml de Tris - HCl 1 M (pH=8,5), 0,5 ml de Tween 20 y 98 ml de H2O. Añadir 100 ug/ml de Proteinasa K justo en el momento en que se va a utilizar. - Muestra de pelo con raíz. 2. - Método: - Lavar de 3 a 5 pelos con raíz de cada animal con agua bidestilada y después con etanol 100%. Dejar secar. - Cortar las raíces de los pelos con unas tijeras esterilizadas con alcohol e introducirlos en microtubos. - Añadir 100 μl de tampón K. - Incubar a 56 ºC durante 45 minutos. - Elevar la temperatura a 95 ºC e incubar durante 10 minutos. - Conservar a 20 ºC hasta su uso. Se han analizado 25 microsatélites, recomendados por el comité de expertos de la FAO/ISAG (Food and Agriculture Organization of the United Nations/ International Society of Animal Genetics) para estudios de diversidad genética en la especie porcina (Tabla 3). Los fragmentos obtenidos mediante la PCR se han sometido a una electroforesis en gel de poliacrilamida en un secuenciador automático capilar ABI 3130XL. El genotipado se ha analizado con los programas Genescan Analysis® v 3.1.2 y Genotyper® 2.5.
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 592 Tabla 3: Microsatélites recomendados por la FAO/ISAG para estudios de biodiversidad en ganado porcino Cro.: Cromosoma, Fluor.: Fluorocromo. Micro. Cro. Fluor. Cebadores (3´ - 5´): Directo Reverso CGA 1p HEX GAACTTTCACATCCCTAAGGTCGT ATAGACATTATGTCCGTTGCTGAT IGF1 5 6FAM GCTTGGATGGACCATGTTG CATATTTTTCTGCATAACTTGAACCT S0002 3q HEX GAAGCCCAAAGAGACAACTGC GTTCTTTACCCACTGAGCCA S0005 5 TET TCCTTCCCTCCTGGTAACTA GCACTTCCTGATTCTGGGTA S0026 16 HEX AACCTTCCCTTCCCAATCAC CACAGACTGCTTTTTACTCC S0068 13 TET CCTTCAACCTTTGAGCAAGAAC AGTGGTCTCTCTCCCTCTTGCT S0090 12 6FAM CCAAGACTGCCTTGTAGGTGAATA GCTATCAAGTATTGTACCATTAGG S0101 7 HEX GAATGCAAAGAGTTCAGTGTAGG GTCTCCCTCACACTTACCGCAG S0155 1q 6FAM TGTTCTCTGTTTCTCCTCTGTTTG AAAGTGGAAAGAGTCAATGGCTAT S0178 8 TET TAGCCTGGGAACCTCCACACGCTG GGCACCAGGAATCTGCAATCCAGT S0215 13 HEX TAGGCTCAGACCCTGCTGCAT TGGGAGGCTGAAGGATTGGGT S0218 X TET GTGTAGGCTGGCGGTTGT CCCTGAAACCTAAAGCAAAG S0225 8 HEX GCTAATGCCAGAGAAATGCAGA CAGGTGGAAAGAATGGAATGAA S0226 2q 6FAM GCACTTTTAACTTTCATGATACTCC GGTTAAACTTTTNCCCCAATACA S0227 4 HEX GATCCATTTATAATTTTAGCACAAAGT GCATGGTGTGATGCTATGTCAAGC S0228 6 TET GGCATAGGCTGGCAGCAACA AGCCCACCTCATCTTATCTACACT S0355 15 6FAM TCTGGCTCCTACACTCCTTCTTGATG TTGGGTGGGTGCTGAAAAATAGGA S0386 11 TET TCCTGGGTCTTATTTTCTA TTTTTATCTCCAACAGTAT SW122 6 HEX TTGTCTTTTTATTTTGCTTTTGG CAAAAAAGGCAAAAGATTGACA SW24 17 TET CTTTGGGTGGAGTGTGTGC ATCCAAATGCTGCAAGCG SW240 2p 6FAM AGAAATTAGTGCCTCAAATTGG AAACCATTAAGTCCCTAGCAAA SW632 7 TET TGGGTTGAAAGATTTCCCAA GGAGTCAGTACTTTGGCTTGA SW72 3p TET ATCAGAACAGTGCGCCGT TTTGAAAATGGGGTGTTTCC SW857 14 HEX TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACC GATCCTCCTCCAAATCCCAT Nota: Autores (2024). Diversidad genética intra - racial Se ha calculado el número medio de alelos por locus (MNA), las frecuencias alélicas, las heterocigosis esperada (He) y observada (Ho) y el contenido de información polimórfica (PIC) con el programa MICROSATELLITE TOOLKIT software para Excel (Park, 2001). S e ha calculado el número efectivo de alelos con el programa PopGene (Yeh and Boyle, 1997).
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 593 Los valores de FIS (coeficiente de consanguinidad) con un intervalo de confianza del 95% se han calculado con el programa informático GENETIX v. 4.05 (Belkhir et al., 2003) y se ha realizado una prueba de equilibrio Hardy - Weinberg (HW) usando el programa G ENEPOP v. 3.1c (Raymond and Rousset, 1995), que aplica el test exacto de Fisher usando el método en cadena de Monte Carlo Markov (Guo and Thompson, 1992) y la corrección de Bonferroni. Se han calculado las distancias genéticas entre individuos (DSA de Bowc ock, 1994) con las que se ha construido un dendrograma utilizando el programa TREEVIEW (Page, 2001). Diversidad genética inter - racial Para este estudio se ha incluido la población porcina de Ecuador en un estudio más amplio que comprende otras razas porcinas Criollas, razas ibéricas incluida una población de jabalís y razas internacionales (Tabla 2). Se han calculado los estadísticos F d e Wright (Wright, 1969): el coeficiente de consanguinidad FIT (coeficiente de consanguinidad de cada individuo con respecto a la población total), el coeficiente de diferenciación genética FST (el efecto de las subpoblaciones en comparación con la població n total) y FIS (coeficiente de endogamia de cada individuo en relación a la subpoblación a la que pertenece). Estos estadísticos se han calculado mediante el programa GENETIX (Belkhir et al. 2003). Se ha realizado un Análisis Factorial de Correspondencia c on el programa GENETIX (Belkhir et al. 2003). Se han calculado las distancias genéticas DA (Nei et al. 1983) con el programa informático POPULATIONS (Langella, 1999). Con los valores de distancia obtenidos se ha realizado un dendrograma Neighbor - Joining me diante el programa TREEVIEW (Page, 1996) para representar gráficamente las relaciones genéticas entre las razas. Estructura genética Se ha realizado un análisis de la subestructura de la población porcina de Ecuador utilizando un algoritmo bayesiano del programa de análisis STRUCTURE v 2.1 (Pritchard et
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 594 al., 2000), que emplea un modelo basado en método de cadenas Markov de Monte Carlo, que estima la distribución a posteriori de cada coeficiente de mezcla de cada individuo (q). Resultados Diversidad genética intra - racial En la Tabla 4 se recogen las frecuencias alélicas (FA), expresadas en porcentajes, de los 25 microsatélites en la población porcina estudiada. Los 25 marcadores han sido polimórficos y se han observado entre un mínimo de 5 alelos para los marcadores S0026, S0227, S0355 y SW951 y un máximo de 22 alelos en el marcador CGA y en el S0005. Se observa en general una alta diversidad alélica. Tabla 4 : Frecuencias alélicas de 25 microsatélites en cerdos Criollos de Ecuador . LOCUS/ ALELO FA LOCUS/ ALELO FA LOCUS/ ALELO FA LOCUS/ ALELO FA LOCUS/ ALELO FA LOCUS/ ALELO FA LOCUS/ ALELO FA CGA S0005 S0090 S0225 S0355 SW72 SW632 160 9,00 186 1,00 198 2,13 182 5,43 180 78,00 190 37,00 182 1,00 178 2,00 190 2,00 200 42,55 184 6,52 184 7,00 192 1,00 190 2,00 184 1,00 192 5,00 202 19,15 186 5,43 194 11,00 198 18,00 192 10,00 190 9,00 200 1,00 204 24,47 192 5,43 206 2,00 200 37,00 194 3,00 192 1,00 204 2,00 206 8,51 194 2,17 208 2,00 202 6,00 196 13,00 194 5,00 206 1,000 208 3,19 196 1,09 S0386 206 1,00 198 11,00 198 5,00 208 10,00 S0101 198 3,26 196 5,21 SW857 200 1,00 200 2,00 210 12,00 186 1,09 200 66,30 200 10,42 188 4,00 204 30,00 202 7,00 212 10,00 188 9,78 202 1,09 202 2,08 192 2,00 206 7,00 204 5,00 214 4,00 194 1,09 204 1,09 204 23,96 194 4,00 208 5,00 206 1,00 216 10,00 196 1,09 208 2,17 206 41,67 196 41,00 210 1,00 210 1,00 218 7,00 198 19,57 S0226 210 8,33 198 22,00 212 12,00 212 4,00 220 1,00 200 46,74 198 26,67 212 3,13 200 15,00 214 4,00 214 5,00 222 4,00 201 20,65 200 27,78 214 5,21 202 10,00 S0068 216 5,00 224 8,00 S0155 202 4,44 SW24 204 2,00 178 2,13 218 5,00 226 2,00 190 23,00 206 1,11 192 5,10 SW91 1 184 9,57 220 6,00 228 6,00 196 18,00 212 11,11 194 3,06 186 10,87 196 17,02 222 4,00 230 8,00 198 3,00 216 7,78 196 6,12 188 4,35 198 6,38 224 13,00 232 3,00 200 33,00 218 8,89 198 10,20 196 15,22 200 1,06 226 5,00 234 1,00 202 11,00 220 2,22 200 5,10 200 26,09 204 14,89 228 4,00 238 1,00 204 12,00 222 5,56 202 12,24 202 4,35 210 3,19 232 1,00 250 1,00 S0178 224 2,22 204 3,06 204 4,35 212 9,57 IGF S0026 184 2,04 228 2,22 206 38,78 206 28,26 214 12,77 194 12,00 200 52,00 192 2,04 S0227 208 8,16 208 6,52 216 9,57 196 2,00 202 11,00 194 26,53 196 85,71 212 6,12 SW936 218 2,13 198 5,00 204 25,00 196 2,04 200 1,02 216 2,04 198 3,33 220 5,32 200 21,00 206 11,00 198 6,12 206 3,06 S0215 200 2,22 226 6,38 202 31,00 210 1,00 200 2,04 220 9,18 180 2,00 202 14,44 204 23,00 SW951 202 2,04 224 1,02 198 1,00 208 30,00 206 5,00 200 80,00 204 7,14 200 67,00 210 1,11 210 1,00 202 8,00 206 30,61 202 3,00 212 8,89 206 1,00 2008 13,27 206 1,00 214 28,89 208 9,00 210 6,12 208 2,00 216 11,11 214 2,00 216 7,00 S0227 SW240 S0002 198 5,00 198 18,00 190 11,96 200 55,000 200 13,00 192 1,09 202 4,00 202 19,00 194 2,17 206 1,00 204 7,00 196 2,17 212 1,00 210 1,00 200 26,09 218 11,00 212 8,00 202 6,52
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 595 220 4,00 214 17,00 204 16,30 222 1,00 216 14,00 206 13,04 224 1,00 218 3,00 208 16,30 218 3,26 220 1,09 Nota: Autores (2024). En la Tabla 5 se recogen los valores obtenidos de Heterocigosidad esperada, Heterocigosidad observada, Contenido de Información Polimórfica (PIC), los valores del estadístico FIS con sus desviaciones estándar y los marcadores desviados del equilibrio Hardy - Weinberg. Por los valores de PIC obtenidos, la mayoría de los mar cadores son muy informativos (PIC > 0,50), aunque los microsatélites S0215, S0227, S0355 y SW951 son medianamente informativos (PIC entre 0,25 y 0,50). Tras la corrección de Bonferroni, ningún marcador está desequilibrado significativamente del Equilibrio de Hardy - Weinberg en esta población. De los 25 microsatélites analizados, 7 detectan un exceso significativo de homocigotos (CGA, S0002, S0068, S0226, SW24, SW240 y SW72) y el resto muestran valores no significativamente diferentes de 0. Este panel de microsatélites se viene utilizando en nuestro laboratorio para la caracterización genética de poblaciones porcinas y se ha comprobado que se comporta adecuadamente en estas poblaciones y que es útil para detectar variabilidad genética dentro de poblaciones. El promedio de alelos en una población (Tabla 5) indica en cierta manera la variabilidad genética de las poblaciones. Este número medio de alelos es elevado (9,52), aunque el número efectivo de alelos (4,99) es sensiblemente inferior debido a que muchos de los alelos se encuentran con frecuencias bajas. Tanto el número medio de alelos como el número efectivo de alelos están por encima de la media mostrada por otras razas porcinas criollas (Revidatti et al 2014). Otra manera de apreciar la diversidad genétic a es mediante la proporción de individuos heterocigotos presentes o heterocigosidad. En la Tabla 5 se recogen los valores de heterocigosidad media esperada (He=0,719) y heterocigosidad media por recuento directo (Ho=0,637) en esta población. El promedio de alelos y los valores de heterocigosidad indican
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 596 que los cerdos Criollos de la costa de Ecuador muestran una diversidad genética alta. El valor de FIS con un intervalo de confianza al 95% con 1000 remuestreos es de 0,116 (0,062 - 0,148) y es significativo, lo que podría ser debido a una desviación signific ativa del equilibrio Hardy - Weinberg. A la vista de los resultados encontrados, se puede concluir que los cerdos Criollos de la costa de Ecuador estudiados presentan una elevada diversidad genética intra - racial, con valores de diversidad genética superiores a los de otras razas porcinas crioll as (Revidatti et al 2014). La raza se desvía significativamente del Equilibrio de Hardy - Weinberg, con un exceso significativa de homocigotos. Tabla 5: Microsatélites analizados, numero de alelos detectados, Numero efectivo de alelos (Ae), Heterocigosidades esperada insesgada (He) y observada (Ho), Contenido de Información Polimórfica (PIC), valores de Fis, su intervalo de confianza y las derivaciones de equipo Hardy - We inberg (HWEd). Microsatélite Alelos Ae He Ho PIC Fis Fis IC HWEd CGA 22 15,34 0,944 0,800 0,931 0,1541 (0,03438 - 0,26218) ND IGF1 8 4,69 0,795 0,760 0,756 0,0444 ( - 0,10408 - 0,18355) ND S0002 11 6,29 0,850 0,696 0,822 0,1834 (0,01216 - 0,33615) ND S0005 22 13,48 0,935 0,840 0,921 0,1027 ( - 0,00612 - 0,20238) ND S0026 5 2,80 0,649 0,540 0,593 0,1698 ( - 0,03248 - 0,35828) NS S0068 13 9,26 0,902 0,766 0,882 0,1519 (0,01714 - 0,27732) ND S0090 6 3,49 0,721 0,723 0,669 - 0,0029 ( - 0,16209 - 0,13830) NS S0101 7 3,23 0,698 0,761 0,646 - 0,0907 ( - 0,26467 - 0,07493) NS S0155 6 4,51 0,786 0,680 0,745 0,1363 ( - 0,03943 - 0,29205) NS S0178 11 5,09 0,812 0,755 0,779 0,0706 ( - 0,08108 - 0,20760) ND S0215 9 2,10 0,529 0,520 0,499 0,0174 ( - 0,19384 - 0,22719) NS
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 597 S0225 11 2,20 0,551 0,478 0,531 0,1331 ( - 0,08049 - 0,34106) NS S0226 11 5,52 0,828 0,644 0,797 0,2236 (0,04661 - 0,38319) ND S0227 5 1,34 0,258 0,245 0,242 0,0526 ( - 0,13509 - 0,33584) ND S0228 10 2,86 0,657 0,620 0,261 0,0568 ( - 0,10771 - 0,20835) NS S0355 5 1,60 0,378 0,320 0,352 0,1538 ( - 0,08554 - 0,39130) ND S0386 8 3,91 0,752 0,604 0,713 0,1985 ( - 0,00134 - 0,37761) NS SW24 11 5,07 0,811 0,612 0,787 0,2469 (0,0803 - 0,39843) NS SW240 9 6,83 0,862 0,720 0,836 0,1666 (0,01977 - 0,30120) ND SW632 13 6,49 0,855 0,820 0,831 0,0408 ( - 0,08273 - 0,15558) ND SW72 6 3,23 0,697 0,480 0,632 0,3135 (0,12239 - 0,49005) NS SW857 8 3,95 0,755 0,820 0,714 - 0,0877 ( - 0,22402 - 0,03897) NS SW911 8 5,19 0,816 0,696 0,782 0,1489 ( - 0.01924 - 0,29939) ND SW936 8 4,62 0,793 0,778 0,753 0,0188 ( - 0,16257 - 0,17833) ND SW951 5 1,53 0,348 0,240 0,326 0,3135 ( - 0,01227 - 0,58625) ND Media 9,52 4,99 0,719 0,637 0,686 Nota: Autores (2024). En la Figura 2 está representado el dendrograma de distancias individuales entre los individuos analizados. No se observa un agrupamiento claro de los individuos en función de la provincia de procedencia, aunque la mayoría de los individuos de Santa Elena se agrupan juntos (en verde) y la ma yoría de los animales muestreados en Machala se agrupan juntos también. Se detecta que hay algún problema de identificación de las muestras 03 y 049 (corresponden al mismo animal), de las muestras 010 y 014 (corresponden al mismo animal y de las muestras 0 15 y 016 (corresponden al mismo animal). Se recomienda revisar la identificación de estas muestras.
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 598 Figura 2: Árbol de distancias individuales DSA de los individuos de cerdos Criollos de Ecuador muestreados en 6 provincias de la costa de Ecuador Nota: Autores (2024). Diversidad genética inter - racial La diferenciación genética entre las 30 poblaciones porcinas incluidas en el estudio es elevada, con los siguientes valores de estadísticos F: FIS=0,076 (0,062 - 0,089), FIT=0,252 (0,235 - 0,270) y FST=0,191 (0,179 - 0,204). Los resultados del Análisis Factorial de Correspondencia (Figura 3) muestran que los cerdos Criollos de Ecuador se posicionan más próximo a las razas Criollas (rodeadas por una
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 599 línea azul), bien diferenciadas del resto de las razas europeas. De este análisis se ha eliminado la raza Meshian debido a que la gran diferenciación genética de esta raza no permite ver la distribución del resto de las razas del estudio. Aun así, hay una elevada diferenciación genética entre las 29 poblaciones restantes. Figura 3: Análisis Factorial de Correspondencia entre 29 poblaciones porcinas . En la representación gráfica de las distancias genéticas DA en un dendrograma Neigbor - Nota: Autores (2024). Joining (Figura 4) se observa los cerdos Criollos de Ecuador (EC) en el mismo clúster que las demás razas Criollas, muy próximo al cerdo de la Amazonía y bien diferenciado de las demás razas. L LX L TW P BR LBL E L TW MF GH P LX LBL BR LBL E
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 600 Figura 4: Representación Neighbor - Joining de las distancias genéticas DA de 30 poblaciones porcinas. Nota: Autores (2024). Estructura genética Se ha realizado un análisis de la estructura de la población con el programa STRUCTURE v. 2.1 (Pritchard et al. 2000). Se ha utilizado un algoritmo bayesiano del programa que calcula la distribución a posteriori de cada coeficiente de mezcla de cada individuo (q). La media de esta distribución representa una estimación de la proporción que el genoma de cada individu o tiene de las poblaciones parentales. Con este programa se hace un análisis de agrupamiento de los individuos estudiados en un diferente número de clusters (K) que representarían el número de poblaciones asumidas utilizando un modelo de mezcla en el cual cada individuo podría contener en su genoma porcentajes variables de las poblaciones ancestrales de las que proviene. 0.1 BCS GH MF PR GUA BRKSH LBLACK TWRTH PIE MSH LWH LDR LXLW SP CEL BOL MANG IB WB CUB RWH DUR NEAW NEAD MEX SAL EC ECAM CP VEN
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 601 En la Figura 5 se presenta gráficamente la estructura poblacional de las 30 poblaciones utilizando el programa informático Structure v.2.1. Se ha realizado con 100000 iteraciones de Burn - in y con número de iteraciones de Cadenas de Markov de Monte Carlo (M CMC) de 200000. Cada individuo se muestra en una barra vertical y cada color representa la proporción del clúster correspondiente (raza en este caso) en forma proporcional. Cuando el número de poblaciones estimadas es 2 (K=2), se separan dos clústers (verd e y rojo). Los cerdos Criollos de Ecuador (EC) se encuentran en el clúster verde junto con todas las demás razas americanas, españolas y el jabalí. Cuando K=3 el cerdo chino Meshian forma un clúster diferente (en azul). Estadísticamente, el número óptimo d e poblaciones es K=23, en el que los cerdos Criollos de Ecuador se agrupan con algunos cerdos Criollos Iberoamericanos. Los cerdos Criollos de Ecuador de las seis provincias de la costa del Ecuador se separan de los cerdos de la provincia de Pastaza (ECAM) a partir del K=28. En la Tabla 7 se observan los porcentajes de individuos de cada raza que se asignan a cada clúster cuando K=23 (K óptimo). El 60,4% de los cerdos Criollos de Ecuador (EC) se asignan al clúster 16, junto con el 11,4 % de los cerdos criol los de la Amazonía (ECAM), el 51,4% de los cerdos de El Salvador y el 42,7 % del Criollo Cubano. Se observa cierto grado de mezcla en los cerdos Criollos de Ecuador (EC) pero no se detecta influencia reciente de cerdos europeos ni de los internacionales.
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 602 Figura 5: Estructura genética de las 30 razas porcinas analizadas. Nota: 1 EC, 2 ECAM, 3 MF, 4 RWH, 5 GH, 6 BCS, 7 MEX, 8 SAL, 9 CUB, 10 GUA, 11 VEN, 12 SP, 13 CP, 14 BOL, 15 PR, 16 NEAW, 17 NEAD, 18 IB, 19 CEL, 20 MANG, 21 BRKSH, 22 TWRTH, 23 LBLACK, 24 DUR, 25 PIE, 26 LWH, 27 LDR, 28 LXLWH, 29 MSH, 30 WB , Autores (2024). Discusión Los resultados obtenidos en este estudio proporcionan evidencia sólida sobre la alta diversidad genética intra - racial de los cerdos criollos de la costa de Ecuador. El promedio de alelos (9,52) y el número efectivo de alelos (4,99) están por encima de lo r eportado en otras razas criollas de América Latina, como los cerdos criollos de Bolivia y México (Revidatti et al., 2014). Estos hallazgos son congruentes con estudios previos que han señalado que las poblaciones porcinas criollas suelen conservar una cons iderable variabilidad genética, lo que
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 603 les permite adaptarse a entornos de manejo y recursos limitados (Linares et al., 2011; FAO, 2015). El exceso significativo de homocigotos identificado en este estudio, reflejado en el valor de FIS (0,116), podría estar relacionado con fenómenos de endogamia, posiblemente exacerbados por la fragmentación geográfica y la falta de intercambio genético entr e subpoblaciones locales. Sin embargo, es importante destacar que esta diversidad genética es una característica clave para la viabilidad de la población a largo plazo y representa un recurso invaluable para la conservación y mejora genética (Scarpa et al. , 2003; Fuentes, 2003). Por otro lado, el análisis factorial de correspondencia y el dendrograma de distancias genéticas muestran que los cerdos criollos de Ecuador están genéticamente diferenciados de las razas internacionales y europeas, ubicándose más cerca de otras razas crio llas iberoamericanas, como el cerdo criollo de Venezuela y el criollo cubano. Esto confirma su identidad genética única y subraya la necesidad de estrategias específicas de manejo y conservación que respeten esta singularidad (Pham et al., 2014; Boitard et al., 2010). Un hallazgo relevante es la ausencia de influencias recientes de razas comerciales europeas e internacionales en el genoma de los cerdos criollos ecuatorianos, lo que refuerza su importancia como reservorio genético autóctono. Estos resultados concuerdan c on el reporte de la FAO (2015), que destaca la urgencia de preservar los recursos zoogenéticos locales frente a la creciente homogenización genética causada por la globalización de las razas comerciales. En términos metodológicos, el uso de los microsatélites recomendados por la FAO/ISAG ha demostrado ser adecuado para caracterizar la variabilidad genética en esta población, proporcionando datos robustos sobre la estructura genética intra e inter - poblacion al. No obstante, la aparición de marcadores como los SNPs podría complementar estudios futuros, aunque es fundamental considerar que los paneles de SNPs suelen subestimar la diversidad genética de razas locales (Boitard et al., 2010; Paetkau et al., 2004).
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 604 En conclusión, este estudio no solo aporta información valiosa sobre la genética de los cerdos criollos ecuatorianos, sino que también enfatiza su papel en la sostenibilidad de sistemas agropecuarios locales. La implementación de programas de conservación y mejoramiento basados en estos datos contribuirá a la resiliencia de los sistemas productivos y al desarrollo socioeconómico de las comunidades dependientes de esta raza. Conc l usión Los cerdos criollos de la costa de Ecuador demuestran poseer una alta diversidad genética, posicionándose como un recurso estratégico para la conservación de la biodiversidad y el desarrollo de sistemas productivos sostenibles. Este nivel de variabilidad g enética no solo subraya su capacidad de adaptarse a condiciones ambientales y de manejo desfavorables, sino que también les confiere un papel crucial en la preservación de los recursos zoogenéticos locales frente a los riesgos asociados con la homogeneizac ión genética de las razas comerciales. La ausencia de una influencia genética reciente de estas razas internacionales resalta la pureza y la identidad genética de los cerdos criollos ecuatorianos, consolidándolos como un componente valioso de la diversidad genética global. Estos hallazgos ofrecen una base sólida para el diseño de programas de manejo y conservación específicos que consideren tanto la preservación de su patrimonio genético como el desarrollo de estrategias que aprovechen su potencial productivo en sistemas agr opecuarios locales. Además, la información generada contribuye a una mejor comprensión de su estructura genética, lo que facilita la identificación de líneas genéticas específicas que puedan ser utilizadas en programas de mejora genética orientados hacia l a producción sostenible y la resiliencia frente a cambios ambientales y económicos. Se destaca la importancia de continuar con investigaciones que profundicen en las características genéticas y productivas de esta raza, utilizando tanto tecnologías moleculares
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 605 tradicionales como emergentes. La integración de estas herramientas permitirá optimizar la gestión de los recursos genéticos locales, favoreciendo su conservación y uso sostenible. Asimismo, se hace evidente la necesidad de fortalecer la cooperación entre las comunidades locales, instituciones académicas y organismos internacionales, promoviendo la implementación de políticas públicas que prioricen la conservación de razas locales como una estrategia clave para garantizar la seguridad alimentaria y la soste nibilidad agropecuaria en contextos de diversidad biológica y cultural únicos como el ecuatoriano. En definitiva, los cerdos criollos de la costa de Ecuador constituyen un ejemplo vivo de la importancia de preservar las razas autóctonas, no solo como patrimonio genético invaluable, sino también como una herramienta clave para enfrentar los desafíos del futuro en materia de producción animal sostenible y conservación de la biodiversidad. Referencias bibliográficas Belkhir, K., Borsa, P., Chikhi, L., Raufaste, N., Bonhomme, F., 2003, Genetix: 4.05 Logiciel sous WindowsTM pour la genetique des populations In: U. d. Montpellier (ed.) Montpellier, France. Boitard S., Chevalet, C., Mercat, M.‐J., Meriaux, J. C., Sánchez, A., Tibau, J. y Sancristobal, M. Genetic variability, structure and assignment of Spanish and French pig populations based on a large sampling. Animal Genetics, 2010, Volume 41, 608‐615. FAO 2000. World Watch List for Domestic Animal Diversity (Roma, FAO). FAO. 2015. The Second Report on the State of the World’s Animal Genetic Resources for Food and Agriculture, edited by B.D. Scherf & D. Pilling. FAO Commission on Genetic Resources for Food and Agriculture Assessments. Rome (available at http://www.fao.org/ 3/a - i4787e/index.html). Fuentes, A. 2003. El cerdo criollo como potencial alimenticio y económico (en línea). Ceniap Hoy nº 3. Consultado 27 marzo. 2018. Disponible en; www.ceniap.gov.ve/ceniaphoy/articulos/n3/texto/afuentes2.htm Guo, S.W. & Thompson, E.A. (1992) Performing the exact test of Hardy - Weinberg proportions for multiple alleles. Biometrics, 48, 361 - 372. Langella, O. 1999. Populations 1.2.28 CNRS UPR9034 http//www.cnrs - gif.fr/pge/bioinfo/populations/index. php.
Código Científico Revista de Investigación Vol. 5 Núm. 2 / Julio Diciembre 202 4 606 Linares V., Linares L. y Mendoza G.2011. “Caracterización etnozootécnica y otencial carnicero de Sus scrofa “cerdo criollo” en Latinoamérica”. Scientia Agropecuaria, 2(2):97 - 110. Nei, M., F. Tajima, and Y. Tateno. 1983. Accuracy of estimated phylogenetic trees from molecular data. II. Gene frequency data. J. Mol. Evol. 19:153 170 Paetkau, D., Slade, R., Burden, M. y Estoup, A. Direct, real‐time estimation of migration rate using assignment methods: a simulation‐based exploration of accuracy and power. Molecular Ecology, 2004, Volumen 13, 55‐65. Page, R.D., 1996, TreeView: an application to display phylogenetic trees on personal computers. Computer applications in the biosciences 12, 357 - 358. Park, S.D.E., 2001. Trypanotolerance in West African Cattle and the Population Genetic Effects of Selection University of Dublin, Dublin. Pham, L.D., Do, D.N., Nam, L.Q., Van Ba, N., Minh, L.T.A., Hoan, T.X., Cuong, V.C. y Kadarmideen, H.N. Molecular genetic diversity and genetic structure of Vietnamese indigenous pig populations. Journal of Animal Breeding and Genetics, 2014, Volume 131, 37 9‐386. Pritchard, J.K., Stephens, M., Donnelly, P., 2000, Inference of population structure using moltilocus genotype data. Genetics 155, 945 - 949. Raymond, M. & Rousset, F. (1995) GENEPOP (Version 1.2): Population genetics software for exact test and ecumenicism. Journal of Heredity, 86(3), 248 - 249. Revidatti MA, Delgado Bermejo JV, Gama LT, Periati VL, Ginja C, Alvarez LA, Vega - Pla JL, Martínez AM, Consortium BioPig (E. Bonilla, F.J. Forero Vizcaíno, R. Galíndez, J.J. Montes - Sánchez, E. Pérez Pineda, A. P. Ponce Alvarado, A. Sierra Vasquez, P. Spone nberg, J. Cañón Ferreras, S. Duner, O. Cortés, S. Llambí, M. Montenegro, P. Zaragoza, C. Rodellar and I. Martín - Burriel). 2014. Genetic characterization of local Criollo pig breeds from the Americas using microsatellite markers. Journal of Animal Science, Nov; 92 (11): 4823 - 32. doi: 10.2527/jas.2014 - 7848. Scarpa, R.; Drucker, A.; Anderson, S.; Ferres - Ehuan, N. 2003. Valuing genetic resources in peasant economies: the case of „hairless‟ creole pigs in Yucatan. Journal of Ecological Economics 45: 427 - 443 Wright, S., 1969, The Theory of gene frecuencies, In: Evolution and genetics of populations. pp. 291 - 293. YEH, F.C. and BOYLE, T.J.B. 1997. Population genetic analysis of co - dominant and dominant markers and quantitative traits. Belgian Journal of Botany 129: 157